Abstract

L'utilisation fréquente des fluoroquinolones dans le traitement des infections a engendré une augmentation de la résistance à ces antibiotiques. La résistance aux fluoroquinolones chez Staphylococcus aureus et Klebsiella pneunioniae est causée principalement par la présence de mutations ponctuelles dans le gène gyrA encodant l'ADN gyrase et le gène grlA encodant la topoisomérase IV. Nous avons développé des tests PCR en temps réel permettant la détection spécifique de S. aureus et de K. pneunzoniae ainsi que les mutations ponctuelles associées à la résistance aux fluoroquinolones à l'aide de sondes moléculaires fluorescentes. Des essais effectués sur des isolats cliniques ont montré une corrélation quasi parfaite entre les résultats des essais PCR et les profils de sensibilité à la ciprofloxacine et à la lévofloxacine. Ces essais de détection rapide (45 minutes) par PCR en temps réel représentent une alternative innovatrice aux méthodes conventionnelles pour l'identification des S. aureus et K. pneunioniae et la détermination de leur sensibilité aux fluoroquinolones qui prennent en général plus de 48 heures.

Alternate abstract:

The frequent use of fluoroquinolones in the treatment of infections has led to an increase in resistance to these antibiotics. Resistance to fluoroquinolones in Staphylococcus aureus and Klebsiella pneunioniae is caused mainly by the presence of point mutations in the gyrA gene encoding DNA gyrase and the grlA gene encoding topoisomerase IV. We have developed real-time PCR assays enabling the specific detection of S. aureus and K. pneunzoniae as well as point mutations associated with fluoroquinolone resistance using fluorescent molecular probes. Tests performed on clinical isolates showed near perfect correlation between PCR assay results and ciprofloxacin and levofloxacin susceptibility profiles. These rapid detection assays (45 minutes) by real-time PCR represent an innovative alternative to conventional methods for the identification of S. aureus and K. pneunioniae and the determination of their sensitivity to fluoroquinolones which generally take more than 48 hours.