Abstract

La synthèse des hormones stéroïdiennes est catalysée par différentes enzymes, dont les niveaux d'expression relatifs varient selon l'espèce, le stade de développement et le type de tissu. L'expression de ces enzymes est régulée par plusieurs hormones peptidiques et par l'augmentation conséquente de l'AMPc ou de Ca ⁺². Elle est également induite en réponse à l'expression du récepteur nucléaire orphelin «steroidogenic factor-1» (SF-1). La première enzyme de cette voie de synthèse est le cytochrome P450scc, qui catalyse la formation de la pregnénolone à partir du cholestérol. Le promoteur du gène codant pour cette enzyme contient une région (entre les nucléotides −155 et −131) spécifiquement active dans les cellules stéroïdogéniques et particulièrement la lignée tumorale JEG-3 provenant de placenta humain. Cet élément −155/−131 ne possède pas de site de liaison à SF-1, mais lie spécifiquement plusieurs complexes protéiques. Afin d'isoler des protéines appartenant à ces complexes, un criblage d'une banque d'ADNc placentaire a été réalisé en utilisant cette région promotrice comme sonde. Il a permis d'isoler un nouveau facteur de transcription que nous avons nommé «transcriptional regulating protein of 132 kDa» (TReP-132). L'expression de TReP-132 induit l'activité trans-activatrice de la région −155/−131 dans différentes lignées de cellules stéroïdogéniques, dans le contexte du promoteur de P450sec ou lorsqu'elle est clonée en amont d'un promoteur minimal. Nous avons par ailleurs montré que dans la lignée de cellules de surrénales humaines NCI-H295, TReP-132 forme un complexe avec SF-1 et le coactivateur général p300 pour induire l'expression de P450scc. Ces données suggèrent que TReP-132 pourrait jouer un rôle important dans la modulation des fonctions physiologiques de SF-1. En dernier lieu, nous avons montré que l'expression de TReP-132 induit—au niveau basal et en synergie avec l'AMPc—les voies de synthèse présentes dans les zones fasciculée et réticulée des surrénales qui produisent les glucocorticoïdes et le DHEA. L'ensemble de nos résultats indique que nous avons isolé un nouveau facteur de transcription impliqué avec SF-1 et l'AMPc dans la régulation des fonctions stéroïdiennes.

Alternate abstract:

The synthesis of steroid hormones is catalyzed by different enzymes, the relative expression levels of which vary depending on the species, developmental stage and tissue type. The expression of these enzymes is regulated by several peptide hormones and the consequent increase in cAMP or Ca +2. It is also induced in response to the expression of the orphan nuclear receptor “steroidogenic factor-1” (SF-1). The first enzyme in this synthetic pathway is cytochrome P450scc, which catalyzes the formation of pregnenolone from cholesterol. The promoter of the gene coding for this enzyme contains a region (between nucleotides −155 and −131) specifically active in steroidogenic cells and particularly the JEG-3 tumor line originating from human placenta. This −155/−131 element does not have an SF-1 binding site, but specifically binds several protein complexes. In order to isolate proteins belonging to these complexes, a screening of a placental cDNA library was carried out using this promoter region as a probe. It made it possible to isolate a new transcription factor that we named “transcriptional regulating protein of 132 kDa” (TReP-132). Expression of TReP-132 induces the transactivator activity of the −155/−131 region in different steroidogenic cell lines, in the context of the P450sec promoter or when cloned upstream of a minimal promoter. We have also shown that in the human adrenal cell line NCI-H295, TReP-132 forms a complex with SF-1 and the general coactivator p300 to induce the expression of P450scc. These data suggest that TReP-132 may play an important role in modulating the physiological functions of SF-1. Finally, we showed that the expression of TReP-132 induces—at the basal level and in synergy with cAMP—the synthesis pathways present in the fasciculate and reticular zones of the adrenal glands which produce glucocorticoids and DHEA. Taken together, our results indicate that we have isolated a new transcription factor involved with SF-1 and cAMP in the regulation of steroid functions.